色譜柱使用
1.取出色譜柱，仔細(xì)查看柱身洗脫液流向箭頭標(biāo)識(shí)，用手旋下柱兩端的塑料堵頭，放好色譜柱，使洗脫液流向和柱身所示流向一致，如圖所示：

2.用手將“連接管路的不銹鋼或者其它材質(zhì)的接頭”旋入色譜柱兩端，管路接頭要和色譜柱接口連接緊密，確保零死體積連接，在色譜儀正常運(yùn)行時(shí)沒有漏液。

色譜柱保存
1.短期保存：間隔不超過四天，色譜柱按平時(shí)維護(hù)程序沖洗至基線平穩(wěn)，反相色譜柱保存在不帶有緩沖鹽、離子對(duì)試劑的有機(jī)相/水溶液中，有機(jī)相不低于20%；正相色譜柱正相使用保存在純正己烷中，反相使用保存在純有機(jī)溶劑中；并將隨柱的塑料堵頭旋緊密封。

2.長(zhǎng)期保存：反相色譜柱保存在80%甲醇或80%乙腈水溶液中；正相色譜柱正相使用保存在純正己烷中，反相使用時(shí)需將柱內(nèi)存儲(chǔ)液用異丙醇置換，zui后用正己烷保存。將色譜柱從儀器上取下，并將隨柱的塑料堵頭旋緊密封。

使用注意事項(xiàng)
液相色譜柱是液相色譜儀的心臟，有嚴(yán)格的生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)和測(cè)試程序，為了充分發(fā)揮其性能，zui大程度延長(zhǎng)其壽命，請(qǐng)仔細(xì)閱讀此部分。
1.色譜柱使用前請(qǐng)先確認(rèn)色譜柱內(nèi)的存儲(chǔ)液
月旭公司色譜柱的存儲(chǔ)液，如沒有特殊說(shuō)明均為質(zhì)檢報(bào)告中所述流動(dòng)相，氨基（NH2）、硅膠柱（SiO2）均為正相條件-正己烷/異丙醇體系，反相柱(C8、C18、Phenyl-Hexyl)均為甲醇/水體系，檢測(cè)前，請(qǐng)用相互溶的試劑將其替換。
2.新的色譜柱平衡
月旭公司建議新的反相色譜柱用色譜級(jí)的純甲醇以低流速?zèng)_洗色譜柱30個(gè)柱體積，再更換成能與檢測(cè)流動(dòng)相互溶的流動(dòng)相沖洗30個(gè)柱體積，zui后用流動(dòng)相穩(wěn)定系統(tǒng)至基線平穩(wěn)；新的正相色譜柱用色譜級(jí)的異丙醇以低流速?zèng)_洗30個(gè)柱體積，再更換成檢測(cè)流動(dòng)相穩(wěn)定系統(tǒng)至基線平穩(wěn)。
3.色譜柱的使用方向確認(rèn)
月旭公司生產(chǎn)的液相色譜柱標(biāo)簽上的箭頭方向?yàn)榱鲃?dòng)相流向，使用過程按此方向可以避免雙向混用，導(dǎo)致兩端填料同時(shí)污染，不利于色譜柱的再生和維護(hù)。
4.流動(dòng)相和樣品保持潔凈
由于懸浮在樣品或流動(dòng)相中的細(xì)小顆粒會(huì)堵塞色譜柱兩端的篩板，月旭公司建議各種試劑選用色譜純級(jí)；如有少量的分析純?cè)噭?，使用前建議用0.45μm孔徑以下的濾膜過濾。

樣品中的雜質(zhì)是造成色譜柱污染、柱效下降的zui主要原因之一，復(fù)雜樣品可選樣品預(yù)處理柱（SPE柱）進(jìn)行樣品處理。如果不方便處理，使用相匹配的保護(hù)柱，樣品溶劑與流動(dòng)相要相匹配。不能出現(xiàn)樣品不互溶，極性相差太大等想象，否則會(huì)造成色譜峰形變差，鬼峰等現(xiàn)象，使用流動(dòng)相溶解樣品能有效的避免上述情況發(fā)生。

5.色譜柱允許的pH范圍
每款色譜柱都有自己特定允許使用的pH范圍，在pH范圍以外使用，會(huì)使硅膠基質(zhì)溶解或鍵合相水解，對(duì)色譜柱造成不可恢復(fù)的損傷。如果在臨界pH處使用，分析結(jié)束后立即用適合于色譜柱保存并與當(dāng)前使用的流動(dòng)相互溶的淋洗液置換掉。

TopsilTM 系列色譜柱pH耐受范圍：

色譜柱維護(hù)
1.柱壓升高
這是每個(gè)色譜工作者都很頭疼的問題，長(zhǎng)時(shí)間使用造成柱壓的緩慢升高通常是正常現(xiàn)象；短時(shí)間甚至是突然的柱壓升高通常是異常升高，排除儀器的故障，確定是色譜柱自身原因，一般有以下幾點(diǎn)：
1) 柱頭的過濾篩板污染(固體顆粒物堵塞、強(qiáng)保留物質(zhì)累積)，解決方法
為：
a.在柱前端加上在線過濾器或保護(hù)柱，用甲醇/水=20/80 1.0ml/min反向沖洗色譜柱180min；
b.在柱前端加上在線過濾器或保護(hù)柱，反向使用；
c.可將柱頭打開，將色譜柱頭中過濾篩板取出，在稀硝酸溶液內(nèi)超聲清洗20min，純水超聲清洗20min，zui后用甲醇超聲清洗20min，重新裝入色譜柱。
2) 柱頭填料污染(固體顆粒物堵塞、強(qiáng)保留物質(zhì)累積)，解決方法為：
a.用可以溶解污染物的溶劑較長(zhǎng)時(shí)間(180min)反向沖洗色譜柱；
b.可將柱頭打開，小心取出被污染的填料，用相同的填料重新裝入修復(fù)。
3) pH使用不當(dāng)造成的損傷：
pH使用不當(dāng)造成固定相的缺失或塌陷，很難使色譜柱恢復(fù)，只能更換色譜柱。

2.使用保護(hù)柱和在線過濾器
樣品和流動(dòng)相中不能*過濾掉及泵磨損、密封圈和管路老化產(chǎn)生的固體顆粒物，進(jìn)入到色譜柱中就會(huì)堵塞篩板，導(dǎo)致柱壓升高，柱效下降，保護(hù)柱和在線過濾器上都有篩板，孔徑與分析柱的孔徑相同，能阻止顆粒物到達(dá)色譜柱，在分析故障中，柱壓升高占很大比例，因此建議您在色譜柱前端加上在線過濾器或者保護(hù)柱。
3.緩沖鹽的正確使用
緩沖鹽通常易溶于水，難溶于有機(jī)溶劑，使用不當(dāng)會(huì)析出，加快泵柱塞桿和密封圈，流通閥的磨損，堵塞色譜柱頭篩板，填料基質(zhì)上的微孔和顆粒間的間隙，使填料板結(jié)柱壓升高，阻礙基質(zhì)上鍵合相的碳鏈自由舒展，使色譜柱保留能力下降，柱效降低，縮短其使用壽命，緩沖鹽析出后很難去除，因此正確的使用緩沖鹽對(duì)延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命非常重要，具體方法如下：“使用前過渡! 使用后沖洗!”

1) 等度條件：分析前后用過渡流動(dòng)相沖洗柱體積不少于20-30個(gè)柱體積，或分析完成后用過渡流動(dòng)相以0.2ml/min（根據(jù)柱規(guī)格調(diào)整）沖洗過夜；
2) 梯度條件：分析前，用與初始流動(dòng)相組成相同的流動(dòng)相以分析流速?zèng)_洗色譜柱不少于20-30個(gè)柱體積，分析后，用該過渡流動(dòng)相沖洗色譜柱不少于20-30個(gè)柱體積，且梯度盡量平緩，避免緩沖鹽析出；
過渡流動(dòng)相：有機(jī)相和水相的比例和分析流動(dòng)相中兩相比例一致，或者水相比例高于分析流動(dòng)相，不含緩沖鹽。
3) 緩沖鹽析出：
方案1：用甲醇/水＝10/90以分析速度流速35℃條件下反向沖洗色譜柱120min；
方案2：用甲醇/水＝10/90以0.2ml/min流速反向沖洗色譜柱過夜。

4.避免強(qiáng)保留物質(zhì)在色譜柱保留
強(qiáng)保留物質(zhì)和大分子化合物在色譜柱中累積，是一個(gè)緩慢的過程，一段時(shí)間后會(huì)對(duì)樣品成分產(chǎn)生額外的保留行為，引起峰變寬，拖尾，使柱效下降，保留時(shí)間變化，到一定程度時(shí)會(huì)導(dǎo)致柱壓升高，對(duì)許多樣品特別是復(fù)雜樣品很難判斷其是否含有強(qiáng)保留物質(zhì)，因此要預(yù)防這一切的方式，堅(jiān)持每天分析完成后用純甲醇或純乙腈反向沖洗色譜柱20個(gè)柱體積以上。

清洗方法：
1) 未使用緩沖鹽，每天分析完成后用純甲醇或純乙腈反向沖洗色譜柱20個(gè)柱體積以上；
2) 使用緩沖鹽，用上述方法去除緩沖鹽后，用純甲醇或純乙腈反向沖洗色譜柱20個(gè)柱體積以上；
3) 補(bǔ)救方法：水–乙腈–異丙醇（或氯仿）–乙腈–水，每一步需要沖洗不少于30個(gè)柱體積。
注意：不要輕易打開柱頭，一旦打開，很難恢復(fù)到新柱的水平。因?yàn)橹^打開而造成的檢測(cè)后果，客戶自行負(fù)責(zé)。

色譜柱再生
色譜柱作為液相色譜中昂貴的色譜耗材，會(huì)隨著使用時(shí)間和進(jìn)樣次數(shù)的增加，會(huì)出現(xiàn)異常的色譜現(xiàn)象，如果一根色譜柱的柱效太低或者柱壓太高，通常認(rèn)為該色譜柱使用壽命已到，為了延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命，除了*按照每一款色譜柱的性能使用以外，適當(dāng)?shù)纳V柱再生是很有效的途徑。
1.氰基（CN）色譜柱維護(hù)和再生
CN基柱屬于中等極性的固定相，作反相色譜時(shí)操作和維護(hù)和C18柱*相同，增加水相比例，可以促進(jìn)樣品的洗脫。但是CN屬于短鏈的鍵合相，水相比例太高易使CN鍵水解，尤其在色譜柱pH耐受范圍以外，酸性和堿性條件下柱壽命會(huì)下降很快。如果在這個(gè)條件下使用，需要按以下程序用15個(gè)柱體積溶液沖洗，如下：95%水/5%乙腈–THF四氫呋喃–95%乙腈/5%水并保持95%乙腈/5%水繼續(xù)沖洗，以低流速0.2-0.5mL/min過夜沖洗。
在pH耐受范圍條件使用時(shí)，也比較傷柱子，要注意沖洗，可以參照上述方法，時(shí)間可適當(dāng)減少。柱子使用一定時(shí)間后，柱效下降，需要老化再生，再生時(shí)用15個(gè)柱體積的下列溶液沖洗：95%水/5%乙腈–THF四氫呋喃–95%乙腈/5%水再走流動(dòng)相即可。

CN柱用于正相時(shí)，當(dāng)柱子使用一定時(shí)間后，柱效下降，可清洗一下恢復(fù)柱性能，再生時(shí)用10個(gè)柱體積的下列溶液沖洗：氯仿–異丙醇–二氯甲烷再走流動(dòng)相即可。
CN柱的pH范圍在pH 2.0-8.0。
CN柱的保存，可用異丙醇或正己烷保存（保存溶劑中不能含水），兩端封好，流動(dòng)相改變時(shí)要注意過渡和兩相之間的互溶。

2.反相柱再生
反相色譜柱是使用zui普遍的色譜柱之一，除按照以上內(nèi)容使用以外，必要的再生清洗可以有效的延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命，用下列每種溶劑20~30個(gè)柱體積沖洗：
100％甲醇–100％乙腈–75％乙腈/25％異丙醇–100％異丙醇 –100％二氯甲烷–100％正己烷–100％異丙醇–100％甲醇
3.正相色譜柱的再生
正相氨基柱的鍵合官能團(tuán)氨丙基要比C18、C8柱的鍵合官能團(tuán)易水解，所以其使用壽命稍短，特別是使用反相條件時(shí)，要嚴(yán)格控制pH值范圍，pH值越低流動(dòng)相中水的比例越高越易發(fā)生水解。
注意：所有試劑都要嚴(yán)格脫水

用氨基柱檢測(cè)酸性物質(zhì)可能會(huì)使略帶負(fù)電荷的氨基官能團(tuán)質(zhì)子化，一定程度上改變對(duì)某類的分析物保留性質(zhì)或表現(xiàn)為柱效下降，再生建議是：

用5-10個(gè)的柱體積的含0.5-1.0％NH3的50-50乙腈-水溶液沖洗（沖洗后用不含堿的流動(dòng)相洗去多余的氨），分析酸性分析物時(shí)建議在流動(dòng)相中略微添加少許氨如0.1％。
填料被樣品中雜質(zhì)累積污染，色譜柱表現(xiàn)行為柱壓增高柱效降低等，依次用：甲醇–異丙醇–氯仿–正己烷–氯仿–異丙醇–甲醇沖柱子（各以0.5ml/min的流速，20個(gè)柱體積），再換流動(dòng)相。
NH2柱用于反相條件時(shí)，NH2鍵會(huì)水解，尤其是在該柱子pH范圍以外，在酸性和堿性條件下柱壽命會(huì)下降很快，如果在這個(gè)條件下使用需要清洗一下，需要用10個(gè)柱體積溶液沖洗，也是正相條件下使用色譜柱的再生，建議：95％水/5％乙腈–THF四氫呋喃–95％乙腈/5％水，并保持95％乙腈/5％水繼續(xù)沖洗，以低流速0.2-0.5mL/min過夜沖洗。

反相使用氨基色譜柱的再生（每種淋洗液不少于30個(gè)柱體積）：NaOH(pH 9.0)–色譜純水沖–平衡到流動(dòng)相或者適合保存的溶液。
其它正相柱（硅膠柱，Diol柱）的再生（每種淋洗液不少于20個(gè)柱體積）：正己烷–異丙醇。
正相柱除水：含2.5% 二甲氧基丙烷(dimethoxypropane)和2.5%冰醋酸的正己烷沖洗30個(gè)柱體積。